高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中冰片含量简单准确

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日前，第四军医大学西京医院药剂科研究人员经研究发现，采用高效液相色谱衍生化法测定脑脉康中的冰片含量，方法简单、准确、可行。
冰片具有通诸窍、散郁火、消肿止痛之功能，常用于内服及外用中成药中。由于冰片化学结构无特征紫外吸收，因此主要采用薄层扫描法和气相色谱法。高效液相色谱仪是实验室常见分析仪器，适用于常见中成药成分的分离和测定，但紫外吸收弱的化合物直接检测较为困难。
研究人员根据冰片结构中含羟基的特点，将3，5-二硝基苯甲酰氯可作为此类化合物的衍生化试剂，在叔胺或吡啶类化合物的催化下可和冰片反应生成具强紫外吸收的3，5-二硝基苯甲酸冰片酯。为建立一种测定脑脉康中冰片含量的新方法，研究人员利用此原理以反相高效液相色谱法（HPLC）对脑脉康中冰片含量进行了测定方法学研究。他们将柱前衍生化试剂在乙腈中反应，以3，5-二硝基苯甲酰氯为衍生化试剂（与冰片的摩尔比为20倍），4-二甲氨基吡啶为催化剂（与冰片的摩尔比为40倍）。然后在ODS柱上，以甲醇誜水（88誜12）为流动相，检测波长225纳米，高效液相色谱测定脑脉康中冰片含量。
研究结果发现，冰片在1~10微摩尔范围内，色谱峰面积与进样量呈线性关系（R2=0.9996，P<0.01）。两批脑脉康中冰片的含量分别为7.9%和7.1%，RSD分别为1.0%和1.5%（n=5）。平均回收率为99.9%，RSD为1.8%(n=4)。
据研究者介绍，冰片是一味常用的中药，有合成和天然之分，主要成分是互为异构体的龙脑和异龙脑。其化学结构无特征紫外吸收，无法直接用实验室常见分析仪器高效液相色谱仪进行含量测定，因此采用衍生化HPLC法是测定这类化合物较好的方法。冰片结构中含羟基，而3，5-二硝基苯甲酰氯是羟基化合物常用的衍生化试剂，在叔胺或吡啶类化合物的催化下可和冰片反应生成3，5-二硝基苯甲酸冰片酯。这种新化合物具有较强的紫外吸收，龙脑和异龙脑在此色谱条件下显示为单峰，从而利用柱前衍生化反相HPLC法间接完成了脑脉康中冰片含量的测定。此法采用的衍生化反应条件简单，衍生化产物稳定，样品前处理容易，具有较好的线性关系和回收率，有可能也适用于其他含冰片中成药的质量控制。