酸奶饮料中低聚木糖的测定

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原理：酸奶饮料中蔗糖、乳糖及添加剂干扰低聚木糖组分的分离，为了更准确地测定酸奶中低聚木糖的含量，将酸奶饮料用氢氧化铜沉降蛋白、脂肪，再用60％乙醇水溶液沉降去除大分子多糖及高聚合度低聚糖，而后进行硫酸水解，低聚木糖组分水解变为木糖。酸奶饮料中低聚木糖含量（％，以木糖计）即为酸奶饮料中水解前后木糖含量的差值。
步骤：1．试剂：
●4mol／L硫酸：98％硫酸用水稀释而成，需标定较准确浓度；
●45％氢氧化钠：取22．5g氢氧化钠，加入50ml水溶解即可；
●4％氢氧化钠：取8．0g氢氧化钠，加入200ml水溶解即可；
●7％硫酸铜：取35．0g硫酸铜结晶，加入500ml水溶解即可。无水乙醇（AR）、乙腈（色谱级）。
2．仪器及色谱条件：
●仪器：高压液相系统：515高压泵、U6K进样阀、柱温箱、2414示差折光检测器、色谱工作站，真空泵或电吹风。
●色谱条件：色谱柱：键合氨基柱（nova－pak250×3．9mmidsteel，4μm）；
流动相：乙腈∶水（75∶25v／v）；流速：1．0ml／min；柱温：35℃；示差检测器温度：35℃。3．样品预处理：
●取10．0ml酸奶饮料，加入水20ml，摇匀，加入7％硫酸铜，4％氢氧化钠4．0ml，加水定容100ml，摇匀；
●滤纸过滤，取滤液50．0ml，浓缩至10．0ml，加入无水乙醇12．0ml，沉降聚合度高的低聚糖；
●用0．45μm膜过滤，用电吹风（大于50℃）吹赶尽乙醇，用水溶解定容至10．0ml（该溶液为样品水解前上机测定溶液M1）；
●取9．0ml于水解管中，加入4mol／mlH2SO41．62ml，摇匀，于100℃水解1小时，冷却；
●用45％NaOH中和（pH值5～6），加入少量活性炭粉脱色，冷却；
●滤纸过滤，取清液3．0ml，加入12．0ml无水乙醇，摇匀；
●当有Na2SO4析出时，用0．45μm水相膜过滤，取滤液10．0ml，电吹风吹干；
●加水溶解，定容1．0ml，用0．45μm水相膜过滤（该溶液为样品水解后上机测定溶液M2），上机测定。4．总稀释体积：V（ml）＝100×10／50×（9．0＋1．62＋1．44）／9．0×（3．0＋12．0）／3．0／10．0×1．00＝13．4ml。
5．计算：以木糖为标样，外标单点校正。
Mi（g／100ml，以木糖计）＝Aspl／Astd×Cstd×V×10－3／W×100低聚木糖含量X（％，以木糖计）＝M2－M1M2：酸奶饮料水解后低聚木糖含量（％）；M1：酸奶饮料水解前低聚木糖含量（％）；
Aspl：样品中木糖组分峰面积；
Astd：标样木糖组分峰面积；
Cstd：标样木糖组分浓度（mg／ml）；V：总稀释体积（ml）；W：样品重量（ml）。