银杏叶中有效成分的提取

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[b]摘　要[/b]研究了从银杏叶中提取总黄酮甙和萜内酯等有效成分的4种方法，即(1)水提-醇沉-酯萃法；(2)丙酮-盐水-提取法；(3)醇提-酯萃法；(4)乙醇提取-树脂吸附法。其中方法(3)和(4)已经中试，提取物总黄酮质量分数分别为26.20%、31.62%。萜内酯质量分数为6%，达到德国同类产品质量要求.
[b]关键词[/b]银杏叶；提取；总黄酮
我国是银杏的故乡，拥有世界70%以上的储量，湖北、江苏、江西，浙江、山东等省是我国银杏主要产地。关于银杏的药用价值，我国古代就有记载。现代医学研究证明[SB]［1，2］[/SB]，银杏叶中的黄酮甙和萜内酯，对心脑血管疾病有卓越的治疗效果，对老年性痴呆也疗效明显。我国以银杏提取物为原料制成的药物制剂、保健食品、化妆品，行销国内外市场，年销售额达到20～40亿美元。
银杏叶中含有多种成分，包括总黄酮甙类、萜类、烃基酚类，多烯醇类以及生物碱、糖、淀粉、蛋白质和无机盐。上述成分很多性质相近，分离纯化十分困难，国内外均采取从银杏叶中分离出总黄酮甙和总萜内酯等有效成分，一般采用溶剂萃取、树脂或活性炭吸附、沉淀分离等步骤。最近出现的超临界萃取法是一很有发展前途的新方法。
笔者以湖北安陆的银杏叶为原料，参考国内外文献[SB]［3～5］[/SB]研究了4种提取方法： (1)水提-醇沉-酯萃法；(2)丙酮-盐水-提取法；(3)醇提-酯萃法；(4)乙醇提取-树脂吸附法；对方法(3)、(4)进行了扩大试验，提取物总黄酮甙质量分数39.83%，萜内酯≥6%，达到了德国Schwabe 公司生产的EGB761银杏叶标准提取物的要求。[b]
[b]1　实验部分
1.1　试验原料及仪器
银杏叶：产地湖北安陆（干叶）；树脂：大孔树脂D101、D201，天津南开大学附属工厂生产；乙醇，乙酸乙酯均为工业级。
GILSON 715型高效液相色谱仪，法国吉尔森公司；HP 8452 二极管阵列分光光度计，美国惠普公司。[b]
[b]1.2　实验方法及步骤[/b]
1.2.1　醇提－酯萃法　称取干银杏碎叶200 g，置于圆底烧瓶中，分别加入适量水、乙醇溶剂，回流2～3 h，过滤，合并滤液用旋转薄膜蒸发器回收溶剂。溶剂回收率90%～95%，得浓缩浸膏，加入去离子水，冷冻除渣，重复3次，合并清液，用乙酸乙酯萃取，合并酯液，回收乙酸乙酯，得黄色粉状产品，结果见表1之(3)。
1.2.2　醇提-树脂吸附法　 称取干银杏碎叶200 g，加入质量分数50%的乙醇在室温下渗漏，过滤渗漏液，回收乙醇得棕色流膏71.7 g，加入去离子水100 mL，用石油醚（或乙醚）萃取2～3次，以除去叶绿素，用氨水调pH值至8～9，用去离子水调至一定浓度倒入树脂柱中吸附、分离,用不同浓度的洗脱液洗脱，收集洗脱液，减压浓缩，得黄色粉末2.5 g；平均结果见表1之(4)。[b]表1　4种黄酮类提取方法的比较

序号	提取方法	w(黄酮类化合物)／%	回收率／%	外　观
(1)	水提-醇沉-酯萃法	15.00	0.68	黄灰色粉未
(2)	丙酮-盐水-提取法	20.05	2.00	棕色粉未
(3)	醇提-酯萃法	26.20	1.90	黄褐色粉未
(4)	乙醇提取树脂吸附法	31.62	1.25	淡黄色粉未

[b]2　结果与讨论2.1　结果比较
从表1结果发现，(3)、(4)方法产品外观好，黄酮甙含量大于24%，而回收率大于1%，特别是(4)法，其黄酮甙含量可达31.62%。因此，选择(3)、(4)法进行扩大实验，以50 kg干银杏叶为原料能取得与小试验相当的结果。经中国科学院上海药物检验所检验，总黄酮达到了39.83%，其中萜内酯质量分数6%。
[b]2.2　萃取剂浓度的影响
在(3)法中用不同质量分数的乙醇进行萃取，结果见表2。试验中乙醇的质量分数太低提取不完全；乙醇质量分数太高提取杂质较多，分离纯化难度大，产品中黄酮质量分数低于24%，经多次试验选择质量分数70%乙醇为宜。[b]表2　乙醇质量分数对提取物和回收率的影响

w(乙醇)／%	w(黄酮甙)／%	总回收率／%
50	14.92	1.1
95	19.00	0.875
70	26.20	1.90

此外，在③法中，酯萃取之前用冷冻除渣效果较好，使酯萃过程中有效成分不易乳化，同时也可除去杂质，有利于纯化。
[b]2.3　树脂的选型
在(4)法中树脂选型很关键，选用国产D101、D201均得到满意结果。在进入树脂吸附分离前，必须用石油醚或乙醚抽提叶绿素，叶绿素的存在会影响树脂吸附容量及树脂的再生。
[b]3　结　语[/b]
实验结果表明，用醇提酯萃法和醇提树酯吸附法从银杏叶中提取黄酮甙和萜内酯是可行的，黄酮甙质量分数分别为26.20%和31.62%，萜内酯均为6%，达到了德国同类产品的标准。在保证质量的前题下，如何提高提取物的收率仍是一有待深入研究的课题。