灯盏花乙素单体(朗瑞西乐)研究进展

来源：

为加快我国西部地区医药科学的发展,提高西部地区心脑血管疾病的诊疗水平,2006年8月5日-6日第7届全国心脑血管疾病高级学术论坛在青海省西宁市举行。在本次论坛上,北京大学人民医院孙宁玲教授主持召开了灯盏花乙素单体(朗瑞西乐)研究进展卫星会,第二军医大学药学院苏定冯教授向与会者介绍了朗瑞西乐在基础研究方面取得的新进展。
灯盏花素制剂的原料是从菊科植物短葶飞蓬的干燥全草——灯盏花中提取分离得到的,目前对该种植物的研究较多,其中灯盏花乙素是唯一作用明确的活性成分。通过紫外光谱、红外光谱及磁共振等方法确定灯盏花乙素的结构式为5,6,4’—三羟基黄酮—7—葡萄糖醛酸甙。
灯盏花乙素可通过多种作用机制实现其对急性脑缺血的明显保护作用:可抑制血小板聚集,抑制体内凝血功能和促进纤溶活性,从而抑制血栓形成;通过抑制蛋白激酶C激活所致的脑血管痉挛收缩,增加局部脑血流量,改善脑微循环,减少炎性细胞黏附浸润,保护缺血后脑组织;还能加快脑血流速度,增加脑血流量,改善微循环,最终改善血液流变学。
同时,灯盏花乙素对心肌也有保护作用。在灯盏花素抗家兔心肌缺血再灌注损伤的药理研究中,将实验家兔随机分为3组,各组家兔均结扎左室支40分钟,松开结扎线再灌流30分钟。Ⅰ组在结扎前10分钟由耳静脉输入灯盏花素,Ⅱ组输入维拉帕米,Ⅲ组静注同容积生理盐水。在结扎前及结扎、再灌后每10分钟,测左室内压峰值(LVSP)。结果显示,再灌注后30分钟内,灯盏花素组LVSP下降程度比生理盐水组及维拉帕米组小,差异有极显著意义(P<0.01)。此外,其他心肌保护机制还包括:抑制肌酸磷酸激酶(CPK)释放,抑制Ca2+内流,舒张冠脉血管,降低血液黏度,增加冠脉血流量等。
虽然灯盏花乙素对缺血性脑血管病及冠心病的治疗有非常明确的疗效,但是由于提取工艺的限制,目前灯盏花制剂普遍存在灯盏花乙素纯度不高,疗效不稳定的情况。朗瑞西乐(诺氏制药生产)是通过先进工艺生产出的高纯度灯盏花乙素单体制剂。因此,苏教授等对朗瑞西乐和普通灯盏花素的药物纯度和主要药物效应进行了比较。
朗瑞西乐纯度研究
中国科学院上海药物研究所采用高效液相的方法,比较了朗瑞西乐原料与其他市售产品灯盏花乙素的含量。从朗瑞西乐原料液相图与标准品液相图比较可见,朗瑞西乐原料的纯度与标准品非常接近。相比之下,目前市售灯盏花制剂则含较多极性与灯盏花乙素差距较大的杂质,且灯盏花乙素含量与标准品差距较大。通过实验结果可见,朗瑞西乐产品所用原料灯盏花乙素含量远远高于市售其他原料(高10%~20%),而原料的纯度为制剂的有效性和安全性提供了保证。
朗瑞西乐药理作用研究
第二军医大学药理学教研室进行了朗瑞西乐与灯盏花素注射液主要药效学和急性毒性的比较研究。
1. 急性毒性试验
研究者选取昆明种小鼠,采用腹腔注射给药,计算各组小鼠的死亡数,观察14天,计算2个药物的LD50。结果显示,两药的LD50接近,朗瑞西乐的LD50为2402 mg/kg,灯盏花素LD50为2682 mg/kg。
2. 对冠脉结扎大鼠心肌梗死面积的影响
选取SD雄性大鼠,设2~3个剂量组及溶剂对照组。采用乙醚麻醉,结扎冠状动脉左前降支,造成急性心梗模型,4小时后处死动物,取心脏称左室重,然后将左室沿矢状切面剖开,置0.1%四硝基唑氮蓝溶液中染色,观察梗死面积,做出药物对心肌梗死面积影响的量效曲线。
结果显示,朗瑞西乐15 mg/kg组、50 mg/kg组大鼠心梗范围显著少于对照组,梗死区重与左心重比值与对照组相比有显著差异;而灯盏花素注射液各剂量组则不能减少急性心肌梗死大鼠心梗范围。
3. 对大脑中动脉阻断大鼠脑梗死面积的影响
采用SD雄性大鼠,水合氯醛麻醉,大鼠仰卧固定,分离一侧颈总动脉、颈外动脉和颈内动脉,将一细尼龙线(直径约0.27 mm)缓慢插入大脑中动脉,阻断该动脉血流,制作局灶性脑梗模型。经静脉给药,24小时后进行行为学评分,处死动物,取出大脑做2%氯化三苯基四氮唑(TTC)染色,用计算机化图像分析系统计算脑梗死面积,做出药物对脑梗死面积影响的量效曲线。
结果显示,朗瑞西乐各剂量组脑梗死区面积/危险区面积比值均显著低于对照组(对照组、朗瑞西乐5 mg/kg组、15 mg/kg组、50 mg/kg组分别为59±7、44±3、40±2、33±6,P值均<0.01),同样,灯盏花素各剂量组脑梗死区面积/危险区面积比值也均显著低于对照组(P<0.01),但梗死面积减少程度不如朗瑞西乐各组。
4. 对麻醉犬急性心肌梗死的保护作用
取杂种犬,体重10~13公斤,雌雄各半,每组6只,分3组。采用戊巴比妥钠麻醉,气管插管,接呼吸机,开胸后行机械通气,记录心外膜电图。常规手术分离左冠状动脉前降支第一和第二分叉中间部位,用两步结扎法造成急性心肌缺血模型,给受试药物后30、60、120、180分钟时记录心电图。180分钟后取心脏,称全心重量和左心室重。然后将左室切成0.5~1 cm厚的心肌片,用生理盐水洗净,置37℃ 0.1% 氯化硝基四氮唑蓝溶液染色。给药后主要观察指标为心外膜电图ST段抬高程度,心肌梗死范围等定量指标。
结果显示,对照组结扎未给药时心外膜电图ST段抬高程度与给药后无显著差异,朗瑞西乐组给药30分钟后,心外膜电图ST段抬高即开始回落,与结扎未给药时相比有显著差异(P<0.01),给药后60~180分钟,心外膜ST段抬高进一步回落。值得注意的是,灯盏花素组用药后30、60分钟时心外膜电图ST段抬高较结扎未给药时无明显改变,但用药后120、180分钟时,心外膜电图ST段反而进一步抬高。
对3组动物心肌梗死范围进行检测发现,朗瑞西乐组梗死区重/左心重比值最低,表明该组心梗范围最小。研究者进一步对朗瑞西乐的作用机制进行了探讨研究,观察了朗瑞西乐抗心肌缺血的有效剂量(50 mg/kg)对心肌梗死犬缺血区心肌细胞凋亡的影响。结果显示,朗瑞西乐组心肌细胞凋亡指数显著低于对照组(34.7%±4.25%对41.8%±2.77%,P<0.05),表明朗瑞西乐能显著抑制心肌细胞凋亡。
小 结
●朗瑞西乐对减少急性心梗大鼠梗死面积、减少脑梗死面积有明确作用;
●朗瑞西乐注射液对大鼠急性心梗和脑梗的疗效优于灯盏花素注射液。